Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次显现出胰岛诱发球受体到显现出1改进型高血压药理学病因的实质性率在幼儿中后期就有极好的详细描述，多个胰岛诱发球受体阳性的幼儿里面有70%在毒素转换后10年底肺结核高血压，而随访15年的幼儿这一数目增大到84%。相对来说之下，占药理学1改进型高血压一半以上的改进型1改进型高血压的发病机制还并未得到充分的研究者。

越来越多的人开始采用分段系统来定义1改进型高血压的实质性：性状在显现出多种胰岛诱发球受体时踏入第1前期，显现出皮质醇异常时踏入第2前期，显现出病因时踏入第3前期。一些多发胰岛诱发球受体阳性的性状，在1期和2期，实质性较极快，并发展为发病的1改进型高血压。我们之后详细描述了一组在首次扫描到多种胰岛诱发球受体样本后至少10年无高血压的很极快实质性者，这组患儿人数少，但特点非常明确。随后，我们发现胰岛自身上皮细胞特异性CD8+T细胞膜反应在实质性很极快的患儿里面必需不存在，但在近期发病和长期存在的高血压患儿里面很容易扫描到。这可能会确实，与实质性患儿相对来说，这些患儿诱发反应的通气增强。

早期研究者确实，尽管通气性T细胞膜(Treg)数量正常，但高血压患儿存在一些系统原因，其里面有数对IL-2的反应潜能降低。此外，高血压患儿里面的畸变CD4+T细胞膜可能会对通气不具抵抗性，显出为畸变T细胞膜的依赖性弱化，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞膜里面IL-2反应弱化。本研究者的目的是详细描述了CD4+通气性T细胞膜(Treg)在一小群极很极快实质性者里面的特点，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

法则：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的患儿亲属里面检查1改进型高血压的脆弱因素。我们之后详细描述了长期很极快实质性者的特点，他们保持多重胰岛诱发球受体阳性超过10年，但并未显现出高血压的药理学病因，极快性或非同步进行性诱发。随后，10名暂时保持无高血压并想要备有大量血液循环样本的很极快实质性者纳入T和B细胞膜系统分析。在目前为止的研究者里面，8名极快实质性者(SP组)，里面位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰岛诱发球受体阳性。所有的参与者都所处1改进型高血压实质性的1期，尽管一些人随后失去了胰岛诱发球受体对某些上皮细胞的阳性反应，然而，一名患儿已经所处2期至少6年，但并未显现出药理学病因，一名患儿被病症为高血压，该测试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该遗传物质同步进行了单独评估。转化外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜术和T细胞膜依赖性试验评估遗传物质里面Treg的频谱、表改进型和系统。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类分析，评估Treg表改进型。

结果：与有益遗传物质相对来说，来自极快实质性体的知觉CD4+T细胞膜的监督聚类看出，激活的知觉CD4+ Treg频谱增大，与糖皮质激素诱导的TNFR关的受体(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c增高的患儿与实质性很极快者和匹配的相异组相对来说，Treg序有所完全相同。系统分析确实，与有益遗传物质相对来说，来自很极快实质性体的Treg特异性的CD4+畸变T细胞膜依赖性明显受损。显出为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的依赖性增大。

三幅1 集中的表改进型分析看出，CD4+Treg变异在极快实质性缓冲区里面增大。由FlowSOM分解的Treg室，组织起来在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示出物隐含鉴定出10个元簇:知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)采用9个完全相同Treg标示出分解的10个元簇的MST。每个节点代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，大得多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点组周边上色。每个节点里面的年糕三幅坚称单个标示出的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看出基本标示出隐含。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解三幅，以及FlowSOM辨认的每个元簇的孔洞。(e-l)相对来说较核素为每个metacluster箱两条路线三幅(核素> 0.05%)具体为HD和SP组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞膜(l)。黄色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模改进型确实，Treg频谱的增大是实质性很极快的标识。AO门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的传奇色彩三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行转化，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组以及遗传物质SP 606(黄色)里面CD25+ cd127的频谱摘要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的箱两条路线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被辨认为SP和HD缓冲区之间的完全相同。(j)箱两条路线三幅看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对来说较核素(数目)。(k)直方三幅看出每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标示出相对来说较隐含与着重隐含(黄色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。着重与所有其他簇里面标示出的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

三幅3 与有益献血者相对来说，实质性很极快者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T细胞膜元簇(知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个隐含标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的隐含热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串联，看出直方三幅(c)和摘要三幅(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有遗传物质有数，p< 0.05(黄色)遗传物质SP 606和匹配的HD不有数在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从AO门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，看出直方三幅(e)和摘要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

三幅4 来自很极快实质性的CD4+ treg细胞膜控制畸变CD4+T细胞膜的潜能降低。SP组用黄色的两条路线和圆圈坚称，HD组用蓝色的两条路线和圆圈坚称，黄色的两条路线/圆圈坚称遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标示出为CFSE, Treg按仔细观察的数目试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培育3天后同步进行流式细胞膜术扫描。(a-d)与CD4+；也者相对来说较应的treg培育(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性数目(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性数目。采用阳性相异(激活的响应细胞膜分别为treg)计算依赖性数目。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T细胞膜对很极快实质性的T细胞膜活化的依赖性更极端。SP组用黄色的两条路线和圆圈坚称，HD组用蓝色的两条路线和圆圈坚称，黄色的两条路线/圆圈坚称遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示出，treg按仔细观察的数目试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培育3天后同步进行流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者携手培育。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性数目(b)。(c,d) CD25依赖性数目(c)和CD134依赖性数目(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自很极快实质性三子的活化知觉CD4+Treg在GITR隐含里面得到了扩展和珍贵，强调了进一步研究者Treg在1改进型高血压风险性状里面的差异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28