Diabetologia：激活但功能受损的知觉Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出现口内自身免疫到出现1标准型冠心病针灸病征的方面率在学龄前时期就有较好的叙述，多个口内自身免疫感染性的学龄前之前有70%在人体内切换后10年内患上冠心病，而随访15年的学龄前这一%-减小到84%。相对于之下，占针灸1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的发病机制还无法得到充份的研究。

越来越多的人开始应用于有系统系统来定义1标准型冠心病的方面：个躯在出现多种口内自身免疫时重回第1过渡阶段，出现血糖异常时重回第2过渡阶段，出现病征时重回第3过渡阶段。一些多发口内自身免疫感染性的个躯，在1期和2期，方面较慢，并发展为发病的1标准型冠心病。我们之前叙述了一第三组在首次探测到多种口内自身免疫比对后数10年无冠心病的近于慢方面者，这第三组病人人数少，但特征非常明确。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T本站粒体催化在方面减慢的病人之前基本上不不存在，但在最近发病和长期不存在的冠心病病人之前很容易探测到。这不太可能声称，与方面病人相对于，这些病人自身突变的调控弱化。

早期研究声称，尽管调控性T本站粒体(Treg)数量出现异常，但冠心病病人不存在一些特性局限性，其之前还包括对IL-2的催化能力减小。此外，冠心病病人之前的震荡CD4+T本站粒体不太可能对调控更具抵抗性，表现为震荡T本站粒体的消除减弱，自然产生的Treg和躯外产生的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T本站粒体之前IL-2催化减弱。本研究的目的是叙述了CD4+调控性T本站粒体(Treg)在这群人近于减慢方面者之前的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以成年人为基础的交叉研究，在21岁不限肺炎的病人亲属之前健康检查1标准型冠心病的危险因素。我们之前叙述了长期减慢方面者的特征，他们保持多重口内自身免疫感染性超过10年，但无法出现冠心病的针灸病征，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并主动提供大量体液比对的减慢方面者纳入T和B本站粒体特性统计分析。在目前的研究之前，8名慢方面者(SP第三组)，之前位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身免疫感染性。所有的参与者都保持稳定1标准型冠心病方面的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些特异性的感染性催化，然而，一名病人已经保持稳定2期数6年，但无法出现针灸病征，一名病人被比对为冠心病，该受试者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该供躯同步进行了原则上评估。分开外周血单个核本站粒体(PBMCs)，采用多参数流式本站粒体术和T本站粒体消除试验评估供躯之前Treg的频率、表标准型和特性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)同步进行无监督聚类统计分析，评估Treg表标准型。

结果：与心理健康供躯相对于，来自慢方面躯的潜意识CD4+T本站粒体的监督聚类说明了，触发的潜意识CD4+ Treg频率减小，与阿托品诱导的TNFR涉及蛋白(GITR)表述减小有关。一名HbA1c升高的病人与方面减慢者和匹配的对照第三组相对于，Treg谱有所并不相同。特性统计分析声称，与心理健康供躯相对于，来自减慢方面躯的Treg触发的CD4+震荡T本站粒体消除明显损害。表现为对震荡CD4+T本站粒体CD25和CD134表述的消除减小。

平面图1 集之前的表标准型统计分析说明了，CD4+Treg亚标准型在慢方面队列之前减小。由FlowSOM分解成的Treg四楼，聚集在来自所有供躯的活CD4+CD45RA -本站粒体上。根据标有物表述比对出10个元簇:潜意识T本站粒体_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T本站粒体;HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒体;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)应用于9个并不相同Treg标有分解成的10个元簇的MST。每个节点代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点第三组区域内上色。每个节点之前的饼平面图指出单个标有的表述级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整躯标有表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解成平面图，以及FlowSOM标有的每个元簇的基岩。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster箱子本站平面图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒体(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T本站粒体(l)。浅蓝色左上角代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩比对。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg频率的减小是方面减慢的标志。PG门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T本站粒体上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的指标性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行分开，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)第三组以及供躯SP 606(浅蓝色)之前CD25+ cd127的频率汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，交叉醒目的簇被标有为SP和HD队列之间的并不相同。(j)箱子本站平面图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组之前，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(%-)。(k)直方平面图说明了每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标有相对于表述与背景表述(紫色);上列，内核Treg_3;比如说一行，内核Treg_4。背景与所有其他簇之前标有的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩比对

平面图3 与心理健康献血者相对于，方面减慢者潜意识treg的GITR减小。每个潜意识CD4+T本站粒体元簇(潜意识T本站粒体_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T本站粒体;HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒体;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，说明了直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和比对，p< 0.07(浅蓝色)所有供躯还包括，p< 0.05(紫色)供躯SP 606和匹配的HD不还包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表述，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅蓝色)串联，说明了直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩比对

平面图4 来自减慢方面的CD4+ treg本站粒体控制震荡CD4+T本站粒体的能力减小。SP第三组用紫色的本站和左上角指出，HD第三组用红色的本站和左上角指出，浅蓝色的本站/左上角指出供躯sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化本站粒体，培养3同一天同步进行流式本站粒体术探测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg培养(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。应用于感染性对照(触发的自发本站粒体下同treg)计算消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡CD4+T本站粒体对减慢方面的T本站粒体活化的消除更敏感。SP第三组用紫色的本站和左上角指出，HD第三组用红色的本站和左上角指出，浅蓝色的本站/左上角指出供躯sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化本站粒体，培养3同一天同步进行流式本站粒体术(CD25反染)和本站粒体因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分比(b)。(c,d) CD25消除百分比(c)和CD134消除百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授之前的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢方面子的活化潜意识CD4+Treg在GITR表述之前得到了扩展和丰富，强调了大幅度研究Treg在1标准型冠心病可能会个躯之前的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28